測序文庫“瘦身”記：揭秘片段篩選如何讓DNA“排隊”上機？
二代測序
二代測序（NGS）是一種DNA測序技術，通過對多個小DNA片段進行平行測序來確定基因序列。而文庫構建就是將DNA或RNA樣本“加工”成適合測序儀讀取的標準化文庫。簡單來說，就像把一本厚重的書拆成碎片，再貼上統一的“條形碼”和“頁碼”，方便機器高效識別。
建庫關鍵步驟
與一代和三代測序不同，二代測序儀對文庫片段的長度有嚴格要求（如Illumina平臺常用300-500bp）。若片段過長，測序讀長無法覆蓋；若過短，可能導致數據冗余或接頭污染。此外，片段均一性直接影響測序數據的質量和后續分析的準確性。就像快遞分揀，只有大小合適的包裹才能高效通過傳送帶，避免卡機或丟失。所以建庫實驗中，片段篩選的準確性尤為重要。
片段篩選的步驟
在建庫實驗中，一般是對接頭連接產物或者擴增產物進行片段篩選。對接頭連接產物進行篩選，可以在擴增前最大限度的去除不合格片段，提高擴增效率；對擴增產物進行篩選，是對最終文庫產物進行雙選，最大限度的保證文庫片段一致性，無論是哪種方式，都能實現文庫片段的嚴格把控。片段篩選的步驟一般包括：
1.磁珠純化：
收集全部產物，去除反應體系中多余的酶、引物等雜質；
2.雙步分選：
第一步去大片段：加入一定比例磁珠，吸附大片段DNA，保留上清中的目標小片段；
第二步去小片段：加入不同比例磁珠，吸附目標片段，去除過小的雜質（如接頭二聚體）；
3.洗脫收集：
將吸附在磁珠上的目標片段洗脫下來，用于下一步實驗。
隨著二代測序應用越來越廣泛，實驗員在進行分選實驗操作時的痛點也越來越明顯：
步驟繁瑣：需多次調整磁珠濃度，純化步驟易出錯；
樣本損失：手工操作可能導致珍貴樣本損耗（尤其微量樣本）；
時間成本高：單次實驗耗時2小時以上，批量處理效率低；
均一性依賴經驗：分選效果受操作手法影響大，新手易翻車；
睿科NGS自動化文庫構建工作站應運而生，解放雙手，實現高通量、高質量、低損耗、標準化的文庫構建。
睿科NGS系列自動化建庫儀
精準加樣
8通道移液頭，兼具單通道功能，可實現1-250μL范圍的精準移液，高效完成試劑添加、樣本混勻、樣本轉移、移除廢液等操作。
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包含12/20個標準盤位，整合PCR板加熱、PCR板制冷、PCR板磁吸附、PCR板振蕩、PCR儀、試劑制冷、定量等各種功能模塊，靈活適用于低/中通量建庫需求，全自動化完成各類文庫構建流程，實現標準化操作。
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片段篩選雖是小步驟，卻是文庫質量的“守門員”。隨著自動化技術的普及，科研人終于可以從重復勞動中解放，專注更有價值的科學問題！如果你還在手動分選DNA片段，不妨試試睿科NGS自動化文庫構建工作站，讓實驗效率飛起來～