解決方案丨雞肝中環(huán)丙氨嗪殘留量的測(cè)定
環(huán)丙氨嗪又名滅蛆靈、滅蠅胺，是一種新型的昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)雙翅目昆蟲幼蟲體有殺滅作用，尤其對(duì)在糞便中繁殖的幾種常見(jiàn)的蒼蠅幼蟲（蛆）有很好的抑制和殺滅作用。它和一般滅蠅藥的不同點(diǎn)是它殺幼蟲-蛆，而一般滅蠅藥只殺成蠅且毒性較大。該藥具有觸殺和胃毒作用，并有強(qiáng)內(nèi)吸傳導(dǎo)性，持效期較長(zhǎng)，但作用速度較慢。短期內(nèi)大量接觸滅蠅胺對(duì)眼睛、皮膚有刺激作用，甚至引起急性中毒，產(chǎn)生惡心、嘔吐、眩暈等健康危害，長(zhǎng)期攝入對(duì)人體健康有不良影響。
對(duì)于動(dòng)物性食品中環(huán)丙氨嗪殘留量的檢測(cè)現(xiàn)可依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 31658.12-2021《動(dòng)物性食品中環(huán)丙氨嗪殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法》，本方法參考上述標(biāo)準(zhǔn)，將試料中的環(huán)丙氨嗪，用三氯乙酸/乙腈溶液提取，混合陽(yáng)離子交換固相萃取柱凈化，高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。
圖-1 環(huán)丙氨嗪的結(jié)構(gòu)式
儀器和耗材
1儀器
Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀
AH 50全自動(dòng)均質(zhì)器
MPE系列高通量真空平行濃縮儀
Auto EVA 80 全自動(dòng)氮吹濃縮儀
Agilent 1260高效液相色譜
2 耗材
MCX固相萃取柱（60 mg/3mL，P/N：RC-204-72855）
3 試劑
乙腈（色譜純）
甲醇（色譜純）
正己烷（色譜純）
乙酸乙酯（色譜純）
25 mmol/L乙酸銨溶液：取乙酸銨0.19 g，用水950 mL溶解，用乙酸調(diào)pH至5.0，用水稀釋至1000 mL。
1%三氯乙酸溶液：取三氯乙酸1 g，用水溶解并稀釋至100 mL。
提取液：取1%三氯乙酸溶液15 mL，用乙腈稀釋至100 mL。
0.1 mol/L 鹽酸溶液：取鹽酸9 mL，用稀釋至1000 mL。
5%氨水甲醇溶液：取氨水5 mL，用甲醇稀釋至100 mL。
流動(dòng)相：取25 mmol/L 乙酸銨溶液40.0 mL，用乙腈定容至1000 mL。
樣品制備
稱取試樣5 g（準(zhǔn)確到±0.01 g），于50 mL離心管中，使用AH 50全自動(dòng)均質(zhì)器自動(dòng)加入提取液15 mL，并均質(zhì)30 s。5000 r/ min離心5 min，取上清液于分液漏斗中，再于殘?jiān)屑犹崛∫?0 mL，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，加正己烷30 mL，振搖2 min，靜置使分層。收集下層液體于MPE濃縮杯中，于MPE真空平行濃縮儀50 ℃水浴中濃縮至1 mL，轉(zhuǎn)至10 mL刻度離心管中，用提取液潤(rùn)洗濃縮杯2次，每次2 mL。合并兩次提取液，以10000 r/min離心5 min，取上清液，備用。
1 凈化
取MCX固相萃取柱安裝在Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀上，依次用甲醇5 mL、水3 mL活化，備用液過(guò)柱（控制流速約1.0 mL/ min）。依次用甲醇3 mL、0.1 mol/L鹽酸溶液3 mL、水3 mL和甲醇3 mL洗柱，棄去洗出液。用5%氨水甲醇5 mL洗脫，收集洗脫液。洗脫液于EVA 80全自動(dòng)氮吹濃縮儀上50℃氮吹吹干，用流動(dòng)相1 mL溶解殘余物，渦旋混勻，過(guò)濾，待上機(jī)分析。
具體的固相萃取方法見(jiàn)圖-2。
2 固相萃取凈化條件
圖-2 Fotector Plus固相萃取方法
液相檢測(cè)條件
1 液相條件
2 色譜圖
圖-3 環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（200 μg/L）
圖-4 雞肝基質(zhì)加標(biāo)環(huán)丙氨嗪色譜圖（25 μg/kg）
結(jié)果與討論
為了驗(yàn)證該方法的回收率，本實(shí)驗(yàn)向雞肝樣品中加入環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行低、中、高三種濃度梯度的基質(zhì)加標(biāo)回收驗(yàn)證（n=6），數(shù)據(jù)如表-1所示。加標(biāo)回收率在74.5%~77.9%之間，RSD值控制在5%以內(nèi)。說(shuō)明該方法能夠運(yùn)用于動(dòng)物性食品中環(huán)丙氨嗪殘留量的檢測(cè)。
樣品加標(biāo)回收率及RSD值（n=6）
總結(jié)
本解決方案操作方便、提取和濃縮效率高、重現(xiàn)性好，符合GB 31658.12-2021《動(dòng)物性食品中環(huán)丙氨嗪殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法》要求。
均質(zhì)過(guò)程采用AH 50全自動(dòng)均質(zhì)器，儀器自動(dòng)加液，通過(guò)水洗、溶劑洗、超聲洗三種刀頭清洗方式，全方位杜絕樣品間交叉污染。
MPE真空平行濃縮儀實(shí)現(xiàn)批量、快速、高效的濃縮過(guò)程，采用水浴加熱和平穩(wěn)的圓周震蕩模式，一批次完成16位大體積濃縮，同時(shí)保證樣品的平行性和可靠性。
濃縮完成后配合Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀進(jìn)行凈化，從活化到上樣、洗脫等一步到位，全自動(dòng)過(guò)程排除人員操作帶來(lái)的誤差，且六通道同時(shí)進(jìn)行萃取，能夠?qū)崿F(xiàn)高通量處理，最多一天能夠處理180個(gè)樣品；將凈化后的樣品直接置于EVA 80高通量全自動(dòng)氮吹濃縮儀中，不僅避免轉(zhuǎn)移的損失，又省時(shí)省力，真正為批量檢測(cè)提供幫助。
