黃精中多種禁用農藥及相關化學品殘留的測定
黃精是百合科、黃精屬植物，以根莖入藥，可用于脾胃虛弱、體倦乏力、口干食少、肺虛燥咳、精血不足、內熱消渴等癥及治療肺結核、癬菌病等。黃精含有多種營養成分，包括糖分、脂肪、蛋白質、淀粉、胡蘿卜素、維生素等。隨著人們對黃精營養價值的認識，黃精需求日漸增多，黃精中的農藥殘留也越來越受關注。本文參考2020版《中國藥典》2341通則農藥殘留量測定法新增第五法《藥材及飲片（植物類）中禁用農藥多殘留測定法》中的快速樣品處理法（QuEChERS），建立了黃精中33種禁用農藥及其單體殘留量的測定方法，保證了黃精藥用的安全性。
黃精試樣用1%的冰醋酸水溶液進行浸泡使其充分浸濕，再用乙腈進行提取，以無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠、石墨化碳黑的混合粉末進行分散式固相萃取凈化，最后用睿科 EVA 80全自動氮吹儀對提取液進行濃縮。實驗結果表明，除了殺蟲脒之外，其他化合物的回收率均在60-120%之間，RSD在10%以內。該方法簡單、快速、高效，且準確度和精密度均符合農藥多殘留的檢測要求，可用于黃精中多農殘的快速篩查和測定。
儀器與耗材
1.儀器
睿科Auto EVA 80 高通量全自動平行濃縮儀
Agilent 1290+6470高效液相色譜/質譜聯用儀
Agilent 8890+7000D氣相色譜/質譜聯用儀
渦旋儀；離心機
2.試劑
乙腈（HPLC）、冰醋酸（AR）、超純水；
GC-MS/MS法33種農藥混合標準儲備液：0.2/0.4/1.0 μg/mL；
LC-MS/MS法30種農藥混合標準儲備液：0.2/0.4/1.0 μg/mL；
GC-MS/MS法內標使用液：磷酸三苯酯 0.1 μg/mL
3.耗材
貨號 | 產品描述 | 規格 |
RC-50070 | 萃取鹽包：6g無水硫酸鎂+1.5g醋酸鈉（含50 mL離心管） | 50個/盒 |
RC-15030 | 15mL凈化管：300mgC18+300mgPSA +90mgGCB+300mgSilica +900mgMgSO4 | 50個/盒 |
RC-5003C | 50mL陶瓷均質子 | 100個/瓶 |
樣品前處理
精密稱取黃精試樣3g，加入15ml 1%冰醋酸溶液，渦旋混勻并震蕩2min，靜置30min，精密加入乙腈15ml，渦旋混勻并震蕩5min，加入RayCure提取鹽包和一顆陶瓷均質子，立即搖散，震蕩1min后置于冰水浴中10min。4000r/min離心5min，取上清液9ml置于RayCure分散式固相萃取凈化管中，渦旋使充分混勻，并震蕩5min使凈化完全，將凈化管4000r/min離心5min，精密吸取上清液5ml轉移至20ml玻璃試管中，使用 EVA 80氮吹儀濃縮至約0.4ml后取出，加乙腈稀釋定容至1ml，LC-MS/MS加0.3ml水，GC-MS/MS加0.3ml磷酸三苯酯，渦旋混勻，過濾膜上機。
圖1 Auto EVA 80 氮吹濃縮條件
檢測條件
1.氣相色譜質譜聯用條件
采用MRM多反應監測模式進行定量分析。GC-MS/MS檢測條件：進樣口溫度280 ℃，不分流進樣，隔墊吹掃流量為3 mL/min，進樣量1.0 μL；載氣為高純He氣，恒流模式，流速為1.0 mL/min；電子轟擊電離源（EI），離子源溫度280 ℃，傳輸線溫度280 ℃。色譜柱為Agilent CP9151 VF-1701MS (30 m x 250 μm x 0.25 μm )。
GC 程序升溫程序：初始溫度40℃，保持1 min；以40 ℃/min速度升溫至120 ℃；以5 ℃/min升溫至240 ℃，以12 ℃/min升溫至300℃，保持4 min。
2.MRM參數
表-1 各農藥的保留時間、監測離子對及碰撞電壓
3.氣質聯用色譜圖
圖-2 33種禁用農藥標準品的總離子流圖（1 μg/mL）
4.高效液相色譜質譜聯用條件
5.MRM參數
表-2 各農藥的保留時間、監測離子對及碰撞電壓
6.液質聯用色譜圖
圖-3 30種禁用農藥標準品的總離子流圖（1 μg/mL）
樣品測試
1.提取液凈化
黃精基質較為復雜，含有糖分、脂肪、蛋白質和色素等成分，共萃取物較多。一方面基質殘留會使得目標化合物的響應被抑制或者增強，而農藥是容易受到基質影響的分析物；另一方面雜質會在色譜柱中積聚，也會縮短色譜柱的壽命。本實驗采用RayCure分散式固相萃取凈化管對提取液進行凈化，提高色譜柱的壽命。該凈化柱的填料為復合填料，由無水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠、石墨化碳黑混合。其中，無水MgSO4起到吸收水分的作用，以保證上氣質前樣品不含水分；C18可以去除樣品基質中的脂肪和脂類等非極性干擾物；PSA可以去除糖類、脂肪酸、有機酸和酚類等干擾物質；GCB可以去除色素和甾醇。
2.基質加標回收實驗
在黃精樣品中添加濃度為40 μg/kg的33種農藥(GC-MS/MS)和20 μg/kg的30種農藥(LC-MS/MS)進行加標回收驗證，使用上述樣品前處理方法，平均回收率和RSD結果如下所示。
表-3 GC-MS/MS法33種化合物的平均回收率
和相對標準偏差(n=3)
表-4 LC-MS/MS法30種化合物的平均回收率
和相對標準偏差(n=3)
總結
1.樣品在加入提取鹽包后要立即搖散，否則容易結塊。使用陶瓷均質子可以防止萃取鹽結塊，并能夠均勻地分散樣品，提高萃取效率，降低人力成本。
2 加入提取鹽包后會放出大量的熱，所以振蕩后需盡快放入冰水浴中冷卻，或者用預冷的乙腈，防止對熱不穩定化合物造成影響。
3在氮吹濃縮過程中，溫度不能超過40°C，氮氣壓力不能過大，濃縮時注意不能吹干，否則將導致部分化合物損失。
解決方案優勢
實驗采用睿科EVA 80全自動平行濃縮儀，可以實現80個樣品同時濃縮，提高濃縮效率的同時，儀器可實現針隨液面的高度下降，加快濃縮速度，節約氮氣成本；人性化的可視化窗口設計可以看到樣品濃縮剩余體積，避免吹干。
RayCure QuEChERS提取鹽包和凈化管采用進口高品質填料，嚴格按照藥典標準進行等量封裝，即拿即用，提取和凈化效果優異，可以節約寶貴的人力資源和時間成本。
