杜絕 “瘦肉精” 隱患！?？萍瘓F(tuán)檢測(cè)方案守護(hù)畜肉安全
瘦肉精是一類藥物的統(tǒng)稱，能夠抑制動(dòng)物脂肪生成，促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)的物質(zhì)都可以稱為“瘦肉精”，其中較常見的有克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等。 進(jìn)入牲畜體內(nèi)后能夠改變養(yǎng)分的代謝途徑，促進(jìn)動(dòng)物肌肉生長(zhǎng)，尤其是促進(jìn)骨骼肌蛋白質(zhì)的合成，加速脂肪的轉(zhuǎn)化和分解，提高牲畜的瘦肉率。
近年來，因食用被“瘦肉精”污染的食物導(dǎo)致中毒事件屢有發(fā)生，且后果極其嚴(yán)重，引起了世界各國(guó)的高度重視。為了保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，保護(hù)人類健康，許多國(guó)家都禁止在食源性動(dòng)物的生產(chǎn)中使用鹽酸克倫特羅，美國(guó)食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA）將肉品中的鹽酸克倫特羅殘留作為必檢項(xiàng)目，歐盟也嚴(yán)禁在飼料中添加“瘦肉精”類藥物。中國(guó)雖然于2000年提出禁止使用“瘦肉精”類藥物，但在畜牧業(yè)生產(chǎn)中“瘦肉精”的使用仍屢禁不止。
本文參考SN/T 1924-2011 《進(jìn)出口動(dòng)物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》標(biāo)準(zhǔn)方法，將試樣中殘留的克倫特羅、萊克多巴胺用β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙酸銨緩沖溶液提取，正己烷脫脂，水相溶液經(jīng)混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱凈化，HPLC-MS/MS測(cè)定’酸化乙腈提取，HLB固相萃取柱凈化，氮吹濃縮，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。
2.儀器和耗材
2.1儀器
V20 垂直震蕩器
Fotector Plus 全自動(dòng)固相萃取儀
Auto EVA 60 高通量全自動(dòng)平行濃縮儀
2.2耗材
MCX固相萃取柱（150mg/6ml）
2.3試劑
1、乙腈（色譜純）
2、甲醇（色譜純）
3、甲酸（色譜純）
4、乙酸乙酯（色譜純）
5、正己烷（色譜純）
6、乙酸銨
7、氨水
8、超純水
3.樣品制備
稱取5g兔肉試樣，置于50ml離心管中，添加50ul同位素內(nèi)標(biāo)工作液，加入20ml乙酸銨緩沖溶液及4顆8mm鋼珠，置于垂直震蕩器中震蕩6min（具體方法參數(shù)見表1），4℃下8000r/min離心5min，收集上清液并加入20ml正己烷，混勻后4℃條件下12000r/min離心5min，棄正己烷層，水相溶液過濾后備用。
表-1 V20垂直震蕩方法
3.1凈化和濃縮
依次用3mL甲醇、3mL水和3mL鹽酸溶液（0.9%）活化小柱，再將上述濾液以1.0mL/min速度加載到固相萃取小柱上，再一次用3mL鹽酸溶液、3mL水、3mL 50%甲醇和3mL正己烷淋洗小柱，棄去淋洗液，真空抽干，用3mL洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，洗脫液用Auto EVA 60 高通量全自動(dòng)平行濃縮儀45℃下吹干，加入1mL0.1%甲酸溶液溶解殘?jiān)^0.22μm濾膜后，供HPLC-MS/MS測(cè)定。
3.2固相萃取條件如圖-1。
圖-1 Fotector Plus固相萃取方法
4.液相液質(zhì)條件
4.1 液相條件
4.2梯度洗脫條件
4.3 質(zhì)譜參數(shù)
4.4 MRM參數(shù)
5.結(jié)果與討論
本次實(shí)驗(yàn)于兔肉中加入2種獸藥標(biāo)準(zhǔn)品混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證（添加含量為0.1ug/kg，n=6），檢測(cè)結(jié)果如表-2所示，加標(biāo)回收在92.1-109.2%之間，RSD在10%以內(nèi)，說名該方案可以運(yùn)用于兔肉中克倫特羅和萊克多巴胺的檢測(cè)。
表-2 兔肉中克倫特羅和萊克多巴胺加標(biāo)回收率及RSD值（n=6）
6.總結(jié)
本解決方案操作方便，提取、凈化、濃縮效率高，回收率滿足GB/T 27404-2008 《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》中規(guī)定的質(zhì)量控制要求。V20 垂直震蕩器通量和效率高，可以有效避免傳統(tǒng)均質(zhì)因清洗不到位帶來的交叉污染；Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀采用全自動(dòng)操作，可以排除人員操作帶來的誤差，從活化到上樣、洗脫一步到位，六通道同時(shí)進(jìn)行；EVA 80系列全自動(dòng)氮吹濃縮儀可自動(dòng)完成樣品的濃縮，采用氮吹針追隨的方式使得濃縮進(jìn)程更快，并節(jié)省氮?dú)?，真正為批量檢測(cè)提供幫助。
